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上海信裕生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： ELISA試劑盒，檢測試劑盒，白介素試劑盒，試劑盒，重組蛋白，單克隆抗體，多克隆抗體，細胞系，原代細胞，胎牛血清，生化試劑，實驗室耗材，abcam抗體等科研產(chǎn)品 |
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2017-4-25 閱讀(433)
ELISA試劑盒按規(guī)定的量加入板孔中
在早期的間接法ELISA試劑盒中，有些作者定出S/N為陽性標準，現(xiàn)多為各種測定所沿用。實際上每一測定系統(tǒng)應該用實驗求出各自的S/N的閾值。更應注意的是，ELISA試劑盒N所代表的陰性對照是不含受檢物質(zhì)的人血清。有的試劑盒中所設陰性對照為不含蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)含量較底的緩沖液，以致反應后產(chǎn)生的本底可能較正常人血清的本底低得多。陽性判定值（cut-off value）一般為陰性對照A值加上一個特定的常數(shù)，以此作為判斷結(jié)果陽性或陰性的標準。ELISA試劑盒用此法判斷結(jié)果要求實驗條件十分恒定，陽性和陰性的對照品應符合一定的規(guī)格，須配用精密的儀器，并嚴格按規(guī)定操作。陽性判定值公式中的常數(shù)是在這特定的系統(tǒng)中通過對大量標本的實驗檢測而得到的。
1 目測定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照；與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。
2 以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結(jié)果的閾值。
3 以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性；P／N值小于2.1，但大于1.5為可疑；P／N小于1.5為陰性。
在ELISA試劑盒中一般有3次加樣步聚，即加標本，加酶結(jié)合物，加底物。加樣時應將所加物加在ELISA試劑盒板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。加標本一般用微量加樣器。每次加標本應更換吸嘴，以發(fā)生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定(如間接法ELISA)需用稀的血清，可在試管中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液，再在其加入血清標本，然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。加酶結(jié)合物應用液和底物用液時可用定量多道加液器，使加液過程迅速完成。
