魚油產(chǎn)品中EPA、DHA含量測定氣相色譜儀

魚油產(chǎn)品中EPA、DHA含量測定氣相色譜儀

普瑞GC-9280型氣相色譜分析法通過新的樣品處理方法和相應(yīng)色譜條件的選擇，實現(xiàn)對魚油等保健品中EPA、DHA的含量測定。普瑞GC-9280型氣相色譜分析法通過直接加入2，6-二叔丁基對甲酚(bht)、內(nèi)標(biāo)二十三酸甲酯、鹽類物質(zhì)來配置標(biāo)準(zhǔn)品和樣品溶液，直接進(jìn)樣進(jìn)行測定。通過對此方法做了方法學(xué)驗證，專屬性好，無雜質(zhì)干擾；線性關(guān)系：r2＝0.9998；精密度6針EPA含量rsd為0.49％，DHA含量rsd為0.36％；回收率EPA達(dá)到99.5％，DHA達(dá)到99.7％。各項驗證指標(biāo)良好，均符合法規(guī)要求。且本方法測定簡便易行，適用于工業(yè)生產(chǎn)中不同批次魚油樣品的測定。

作為優(yōu)選，樣品溶液的配制方法：

魚油原料：稱取20mg樣品于玻璃瓶中，按照衍生化部分描述進(jìn)行操作；

魚油軟膠囊：取20粒軟膠囊的內(nèi)容物于一燒杯中，充分混合，確保不分層，然后按照衍生化部分描述進(jìn)行操作。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，普瑞GC-9280型氣相色譜分析法具有如下顯著優(yōu)點：

1、普瑞GC-9280型氣相色譜分析法是以GC法測定魚油中EPA和DHA的含量，而且此GC法適用于軟膠囊、魚油原料中EPA和DHA含量的測定。

2、普瑞GC-9280型氣相色譜分析法先用20g/l氫氧化鈉-甲醇溶液與樣品進(jìn)行皂化反應(yīng)后，再用甲醇溶液與樣品溶液進(jìn)行反應(yīng)，可更甲酯化樣品。

3、用bht異辛烷溶液溶解樣品，除易于溶解相應(yīng)樣品外，bht還能起到抗氧化作用，減少樣品處理過程中的損失。

4、內(nèi)標(biāo)法的運(yùn)用，保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確。

5、色譜柱選擇hpinnowax，30m×0.25mm，0.25μm,能更好的對組分進(jìn)行分離的同時，節(jié)約儀器運(yùn)行時間。

6、根據(jù)魚油中各組分沸點的不同，對柱溫溫度進(jìn)行選擇，能更好分離樣品，節(jié)約儀器運(yùn)行時間。

以下所用試品及試劑：

試劑：丁羥甲苯(bht)：分析純；二十三酸甲酯：標(biāo)準(zhǔn)品；氫氧化鈉：分析純；甲醇：色譜級；14％甲醇溶液：分析純；異辛烷：色譜級；氯化鈉：分析純；分析純；水：超純水。

標(biāo)準(zhǔn)品：EPA甲酯批號：bcbm9475v，純度：≥98.5％，來源：sigma-aldrich

DHA甲酯批號：bcbn2286v，純度：≥98.5％，來源：sigma-aldrich；

樣品：1.魚油軟膠囊，2.魚油原料，

例1魚油軟膠囊中EPA、DHA含量的測定

魚油軟膠囊EPA和DHA含量的測定：

(1)bht溶液

取50mgbht溶于1000ml異辛烷。

(2)內(nèi)標(biāo)溶液

精密稱取150mg二十三酸甲酯于25ml容量瓶，用bht溶解，并稀釋至刻度。

(3)對照品溶液的配制：

分別精密稱取16mgEPA標(biāo)準(zhǔn)品、12mgDHA標(biāo)準(zhǔn)品于10ml容量瓶，用內(nèi)標(biāo)溶液溶解，并稀釋至刻度線。

(4)樣品處理：

成品(軟膠囊)：取20粒軟膠囊的內(nèi)容物于一燒杯中，充分混合，確保不分層。然后按照衍生化部分描述進(jìn)行操作。

(5)衍生化：

移取2.0ml內(nèi)標(biāo)溶液于每一玻璃瓶中，氮氣吹干；加入1.5ml20g/l的氫氧化鈉-甲醇溶液，擰緊聚四氟乙烯瓶帽；水浴加熱并攪拌7min。冷卻至室溫；加2ml甲醇溶液，擰緊瓶帽；水浴加熱，并時時振搖30min；冷卻至40～50℃，加入1ml異辛烷；轉(zhuǎn)移溶液至20ml試管；加蓋，并快速振搖30s；立刻加入5ml飽和氯化鈉溶液于玻璃瓶中；加蓋，振搖15s；轉(zhuǎn)移上層液于10ml試管；用1ml異辛烷重復(fù)萃??；分兩次用1ml水沖洗異辛烷層；用干燥，得到待檢測樣品溶液。

(6)采用氣相色譜儀對樣品進(jìn)行檢測：

色譜條件：進(jìn)樣量1μl，

a)色譜柱：hpinnowax，30m×0.25mm，0.25μm；

b)載氣：氮氣；

c)柱溫：170℃，保持5min；1.5℃/min至188℃保持2min；1.0℃/min

至212℃；5.0℃/min至230℃保持10min；

d)進(jìn)樣口溫度：250℃；

e)檢測器溫度：280℃；

f)分流比：75:1；

g)進(jìn)樣體積：1μl；

h)流速：1.0ml/min；

i)氫氣流速：40ml/min；

j)空氣流速：400ml/min。

(7)根據(jù)峰面積及計算公式計算，得到樣品EPA和DHA的含量：

式中：

樣品比率(EPA，DHA)------樣品的峰面積(EPA，DHA)/內(nèi)標(biāo)峰面積(EPA，DHA)；

標(biāo)準(zhǔn)品比率(EPA，DHA)-------標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積(EPA，DHA)/內(nèi)標(biāo)峰面積(EPA，DHA)。

儀器特點

(1) 采用了技術(shù)百兆/千兆以太網(wǎng)通信接口、并內(nèi)置IP協(xié)議棧、使儀器可以通過企業(yè)內(nèi)部局域網(wǎng)、互聯(lián)網(wǎng)實現(xiàn)遠(yuǎn)距離的數(shù)據(jù)傳輸；方便實驗室的架設(shè)、簡化實驗室的配置、方便分析數(shù)據(jù)的管理；

(2) 儀器內(nèi)部設(shè)計3個獨立的連接IP地址，可以連接到工作電腦（實驗室現(xiàn)場）、分管電腦（如質(zhì)檢科、生產(chǎn)部等）、以及高管電腦，需要時可實時監(jiān)控儀器的運(yùn)行以及分析數(shù)據(jù)結(jié)果；

(3) 儀器配備的專用工作站可以同時支持多臺色譜儀接入，實現(xiàn)數(shù)據(jù)處理以及儀器反向控制，簡化文檔管理；

(4) 儀器可以通過互聯(lián)網(wǎng)連接到生產(chǎn)廠家，實現(xiàn)遠(yuǎn)程診斷、遠(yuǎn)程更新等（需用戶設(shè)置）；

(5) 儀器配備的8吋彩色液晶觸摸屏，支持熱插拔，可作手持控制器使用；

(6) 儀器采用了多處理器并行工作方式，使儀器更加穩(wěn)定可靠；可選配多種高性能檢測器選擇，如FID、TCD、ECD、FPD和NPD，最多可同時安裝三個檢測器，滿足復(fù)雜樣品的分析需求。
儀器采用模塊化的結(jié)構(gòu)設(shè)計，后期維護(hù)簡單方便。

(7) 全新的微機(jī)溫度控制系統(tǒng)，控溫精度高，可靠性和抗干擾性能；具有八路獨立的溫度控制輸出，可實現(xiàn)二十階程序升溫，具有柱箱自動后開門系統(tǒng)，近室溫控制能力得到提高，升/降溫速度更快；

(8) 色譜機(jī)內(nèi)置低噪聲、高分辨率24位AD電路，并具有基線存儲、基線扣除的功能。

技術(shù)指標(biāo)

操作顯示：彩色液晶觸摸屏

溫控區(qū)域：8路

外部事件：8路；輔助控制輸出2路

進(jìn)樣器種類：填充柱進(jìn)樣、毛細(xì)管進(jìn)樣、六通閥氣體進(jìn)樣、自動進(jìn)樣器

檢測器數(shù)目：3個（最多）；FID、TCD、ECD、FPD和NPD任選

啟動進(jìn)樣：手動、自動可選

通信接口：以太網(wǎng)：IEEE802.3

溫度控制

柱室溫度；

控溫范圍：室溫加+3℃～399℃。

控溫精度：優(yōu)于±0.1℃。

溫度梯度：室溫加+3℃～399℃，柱室有效區(qū)域內(nèi)不大于1%。

設(shè)定溫度與指示溫度之間偏差不大于1℃。

設(shè)定溫度和實際溫度之間的偏差不大于2%。

升溫階數(shù)：20階。

設(shè)定升溫速率：0.1～60℃/min。

線性程序升溫范圍：

每分種30℃時為150℃。

每分種15℃時為300℃。

每分種10℃時為350℃。

初溫終溫控制時間：0～600min。

程序升溫的重復(fù)性不大于2%。

降溫速度：由300℃降至50℃所需時間不大于10min。（其它檢測器溫度升至300℃）。

汽化室、檢測室溫度

控溫精度：

汽化室：±0.1℃（室溫+5℃至200℃以內(nèi)），200℃以上為±0.2℃。

檢測室：±0.1℃（室溫+5℃至200℃以內(nèi)），200℃以上為±0.2℃。

設(shè)定溫度與指示溫度之間的偏差不大于1℃。

閥配置系統(tǒng)

最多搭載8自動控制個閥，可自動序列運(yùn)行(四通閥、六通閥、十通閥以及液體進(jìn)樣閥可選)

可裝側(cè)閥箱、獨立小柱箱

輔助電子流路控制模塊（可壓力/流量控制模式）

零泄漏吹掃技術(shù)

高速切換電磁閥壽命長(100萬次，10mS)

檢測器技術(shù)指標(biāo)

氫火焰離子化檢測器（FID）

檢測限：≤1.9pgC/s [n-C16]

基線噪聲：≤1PA

基線漂移：≤1PA/30min

線性范圍： ≥107(±10%)

數(shù)據(jù)采集頻率100Hz